用昆山舒美KQ-500DV對白芍飲片的指紋圖譜建立

1 材料 

1.1 儀器 

UltiMate 3000型HPLC儀，包括U3000型二極管陣 列檢測器、version 7 Chromatogram 化學(xué)工作站（美國 Thermo Fisher公司）；600型HPLC儀，包括2487型紫外 檢測器、version 2 Empower 化學(xué)工作站（美國 Waters 公 司）；KQ-500 SV型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BT25S型十萬分之一天平、BSA224S-CW型萬分 之一天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]。 

1.2 藥品與試劑

芍藥苷對照品（批號：MUST-16041901，純度：≥ 98.5％）、芍藥內(nèi)酯苷對照品（批號：MUST-16051601，純 度：≥98.5％）、1，2，3，4，6-五沒食子酰葡萄糖對照品（批 號：MUST-16061211，純度：≥98.5％）、兒茶素對照品（批 號：MUST-16030812，純度：≥98％）均由成都曼斯特生 物 科 技 有 限 公 司 提 供 ；沒 食 子 酸 對 照 品（批 號 ： PS-0258-0050，純度：98.5％）、苯甲酰芍藥苷對照品（批 號：PS-13011802，純度：98.5％）、丹皮酚新苷對照品（批 號：PS-08080102，純度：≥98％）均由成都普斯生物科技 有限公司提供；乙腈、甲醇均為色譜純，磷酸為分析純， 水為超純水。 

1.3 藥材 

白芍藥材（編號：S1～S26）經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué) 院張振凌教授鑒定為毛茛科植物芍藥（Paeonia Lactiflora Pall.）的干燥根，并按2015年版《中國藥典》（四部） “炮制”通則制成飲片；白芍飲片（編號：B1～B10，中試生產(chǎn)）、炒白芍飲片（編號：C1～C10）、酒白芍飲片（編 號：J1～J10）均由安徽亳州市滬譙藥業(yè)有限公司提供（中 試生產(chǎn)是指按國家中藥標(biāo)準(zhǔn)化項(xiàng)目要求，將實(shí)驗(yàn)室工藝 在合作企業(yè)進(jìn)行工藝放大生產(chǎn)，以滿足企業(yè)生產(chǎn)的要 求）。樣品信息詳見表1。

2 方法與結(jié)果 

2.1 色譜條件 

色譜柱：SunFire? C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流 動(dòng)相：乙腈（A）-0.05％磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～10 min，8％A→18％A；10～25 min，18％A→20％A；25～ 30 min，20％ A；30～40 min，20％ A→25％ A；40～55 min，25％A →40％A；55～60 min，40％A→45％A；60～ 70 min，45％A→8％A）；采集時(shí)間：70 min；進(jìn)樣量：15 μL；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：230 nm。 

2.2 溶液的制備 

2.2.1 混合對照品溶液 

精密稱取沒食子酸對照品 14.08 mg、兒茶素對照品 10.90 mg、芍藥內(nèi)酯苷對照品 6.76 mg、芍藥苷對照品 11.52 mg、丹皮酚新苷對照品 10.51 mg、1，2，3，4，6-五沒食子酰葡萄糖對照品 10.33 mg、苯甲酰芍藥苷對照品10.99 mg，分別置于10 mL量 瓶中，加甲醇溶解并定容，得各單一對照品溶液。分別 精密量取各單一對照品溶液1 mL，置于同一25 mL量瓶 中，加甲醇至刻度，即得混合對照品溶液。 

2.2.2 供試品溶液 

精密稱取白芍中粉（中粉指能全部 通過四號篩，但混有不超過60％能通過五號篩的粉末） 0.1 g，置于 50 mL 量瓶中，加 50％乙醇 35 mL，超聲（功 率：500 W，頻率：50 Hz）處理30 min，放冷，加50％乙醇 至刻度，搖勻，經(jīng) 0.22 μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液， 即得。 

2.3 方法學(xué)考察

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（編號： S10）適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，以 芍藥苷峰的保留時(shí)間和峰面積為參照，記錄各共有峰的 相對保留時(shí)間和相對峰面積。結(jié)果，9個(gè)共有峰相對保 留時(shí)間的RSD均小于0.19％（n＝6），相對峰面積的RSD 均小于2.34％（n＝ 6），表明本方法精密度良好。取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（編號： S10）適量，分別于室溫下放置 0、2、4、8、12、24 h 時(shí)按 “2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以芍藥苷峰的保留時(shí)間和峰面積為參照，記錄各共有峰的相對保留時(shí)間和相對峰 面積。

3 討論

前期對液相條件進(jìn)行了優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)以乙 腈-0.05％磷酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，各成分 的分離效果較好，保留時(shí)間適當(dāng)，峰形良好。同時(shí)，采用 二極管陣列檢測器在190～400 nm波長內(nèi)進(jìn)行掃描，得 三維光譜圖。結(jié)果顯示，檢測波長為214 nm時(shí)，1，2，3，4，6-五沒食子酰葡萄糖、沒食子酸峰有最大吸收，但峰 形較差，基線波動(dòng)較大，對樣品峰面積的積分影響大；當(dāng) 檢測波長為230 nm時(shí)，芍藥苷峰有最大吸收，且色譜峰 形較好，出峰數(shù)目較多，各色譜峰之間分離度較好，基線 平穩(wěn)，故選擇230 nm為檢測波長。

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