玉竹屬藥食兩用植物，富含豐富的營養(yǎng)及化學(xué)成分，并具有廣泛的營養(yǎng)保健及藥理活性的作用，許多研究已證明植物多糖具有增強(qiáng)免疫、降低血壓、抗炎、抗病毒、調(diào)節(jié)糖脂代謝等多種生理生化作用。傳統(tǒng)的多糖提取工藝有水提醇沉法、堿提取法、酸提取法等，這些方法不但操作流程復(fù)雜，而且提取率低，生產(chǎn)成本也高，多糖純度同樣不高，并且操作的周期過長，不僅增加了提取工藝的成本和人力的消耗，而且所得到的多糖品質(zhì)也有不同程度的損耗。近年來，一些新型的提取方法如酶催化提取法、微波輔助提取法、超聲輔助提取法、膜分離技術(shù)、超高壓提取法等，這些方法與傳統(tǒng)方法相比較，具有更加溫和的提取條件、多糖純度高和提取率高等優(yōu)點(diǎn)，為得到高純度與優(yōu)質(zhì)的多糖提供了更加簡便和高效的方法。本研究通過比較中藥多糖常用的提取方法：水浸提法、超聲波法
和酶解法對玉竹多糖的提取效果，并采用正交試驗(yàn)對玉竹多糖最佳提取方法進(jìn)行工藝優(yōu)化，再以酶法脫蛋白，考察脫蛋白率，以期為玉竹多糖的開發(fā)利用提供理論參考。
1 材料與方法
1.1 藥品與試劑
玉竹，購于佛山萬山紅中藥飲片實(shí)業(yè)有限公司；無水葡萄糖對照品，批號：110833?200904，中國食品藥品檢定研究院，純度為 100%；木瓜蛋白質(zhì)酶（源葉生物）；水為純化水；其他化學(xué)試劑均為分析純。
1.2 儀器
TU?1901紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），AUW120D 十萬分之一分析天平（日本島津），RE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），HWS?24 電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司），KQ5200DE超聲清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司），DHG?9070A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司），DFY?500 粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司），LXJ?IIB離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。
1.3 試驗(yàn)方法
1.3.1 原料處理方法
將干燥的玉竹經(jīng)粉碎后過24目篩，備用。
1.3.2 對照品溶液的制備
取無水葡萄糖對照品 60 mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5 mL，置于100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得（每1 mL含葡萄糖30 μg）。
1.3.3 供試品溶液的制備
精密量取供試品 0.1 mL，置 10 mL 量瓶中，加水使至刻度，搖勻，即得。液比為1∶20。
2.3.2 超聲時(shí)間對玉竹多糖提取率的影響
如圖 4可知，當(dāng)超聲時(shí)間達(dá)到 60 min時(shí)，提取率最高，考慮是因?yàn)闀r(shí)間的增加會(huì)使玉竹細(xì)胞破碎度逐漸增大，讓多糖溶出量逐漸增加，隨之提取率也有所提高；反之，超聲時(shí)間一旦超過 60 min，提取率明顯降低，超聲時(shí)間一旦過長，在增大有效成分的介質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)速度的同時(shí)也讓雜質(zhì)的穿透力增強(qiáng)，溶出也隨之增多，使玉竹多糖的提取率也隨之降低。并且，超聲波具有一定的機(jī)械效應(yīng)、熱效應(yīng)與空化效應(yīng)，在長時(shí)間的超聲作用下，機(jī)械效應(yīng)會(huì)使大分子的多糖斷裂，也會(huì)使溶劑快速產(chǎn)生大量的熱能，使有效成分有所損耗，從而影響多糖的提取率.因此，綜合以上因素，超聲波作用時(shí)間以60 min最佳。
2 結(jié)論
當(dāng)溶劑為純化水、料液比為 1∶20、提取溫度為70 ℃、提取次數(shù)為兩次的相同條件下，比較了水浸提法、超聲輔助水浸提法、酶輔助法提取 3 種方法對玉竹多糖的提取效果，多糖提取率依次是14.24%、20.98%、5.48%。綜合分析，超聲輔助水浸提法所得玉竹多糖的得率最高。2. 采用超聲輔助水浸提法，水的來源廣泛、價(jià)格低廉、使用過程中無毒無害，可以強(qiáng)有力的穿透天然產(chǎn)物的細(xì)胞，提取效果好。經(jīng)過正交實(shí)驗(yàn)，提取工藝的優(yōu)化參數(shù)為液料比 1∶20、超聲時(shí)間 60min、提取溫度 100 ℃、提取次數(shù)為 3 次，在此條件下實(shí)驗(yàn)得到玉竹多糖的提取率為35.52%。
3. 運(yùn)用木瓜蛋白質(zhì)酶來酶解蛋白的主要目的
是使其成為相對分子質(zhì)量較小多肽或者氨基酸，然后醇沉。一般情況下絕大多數(shù)的大分子多糖會(huì)出現(xiàn)沉淀，而分子質(zhì)量相對較小的多肽和氨基酸則大部分保留于溶液中，因此，本文采用木瓜蛋白質(zhì)酶來酶解蛋白，酶用量為玉竹藥材的 0.2%，pH中性，在 60 ℃水浴條件下酶解 2 h，試驗(yàn)表明，蛋白脫除率達(dá)49.19%，多糖保留率為59.34%。
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