淺談超聲清洗器在自由基清除活性研究的使用

五味子為木蘭科植物五味子〔Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.〕干燥成熟的果實，在《神農本草經》中被列為上品中藥，味酸、性甘溫，具有斂肺、滋腎、生津、收 汗、澀精之功效。五味子屬于多年生藤本植物，可用于生產藥品、保健品、飲品及化妝品等。五味子中含 有多種化學成分，如揮發性成分、木質素類、有機酸類、 糖類等。早期相關研究主要集中在木脂素等脂溶性 成分。現代醫學研究表明，五味子多糖具有抗疲勞、 抗焦慮、抗變態、保護肝損傷、保護腸道及清除自由基等 多種生理活性，有重要的研究意義和開發利用價值。

1 材料、試劑與儀器

1.1 材料與試劑

五味子，采收于吉林省集安市，經中國農業科學院 特產研究所許世泉研究員鑒定為木蘭科植物北五味子 〔S. chinensis (Turcz.) Baill.〕的果實；單糖標準品葡萄糖 （Glc）、鼠李糖（Rha）、半乳糖（Gal）、半乳糖醛酸（GalA）、 阿拉伯糖（Ara）、葡萄糖醛酸（GlcA）、甘露糖（Man）（Sigma-Aldrich 公司）；DPPH（Cat# CD4891-500MG，Coolaber 公司）；1-苯基-3 甲基-5-吡唑酮（PMP）、鹽酸-甲醇 標準溶液（源葉生物公司）；維生素 C（VC）（天津市光 復精細化工研究所）；去離子水，由特種經濟動植物加 工實驗室自制；其他試劑均為國產分析純。

1.2 儀器

QD8J（BL）單煎機（青島達爾電子機械銷售有限 公司）；TGL-16A高速臺式離心機（上海安亭科學儀器 廠）；FD-1A-50 低溫冷凍干燥機（北京博醫康技術有限 公司）；昆山舒美KQ-500DE超聲波清洗機；HHS型電熱恒溫水浴鍋（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）；高效液相色譜儀、LC-16 溶劑 輸送泵、CTO-16 柱溫箱、SPD-M20A 紫外檢測器 （日本島津儀器有限公司）；Hypersil ODS2 C18 色譜柱 （4.6 mm×250 mm，5 m）（大連依利特分析儀器有限公 司）；721G可見分光光度計（上海儀電分析儀器有限公 司）；WP-UP-WF-40微量分析型超純水機（四川沃特爾 水處理設備有限公司）。

2 方法

2.1 五味子總多糖的提取

選用干燥的北五味子 500 g，加入 5 L 去離子水，使用單煎機 100 ℃提取 2 h，4 層紗布過濾，殘渣重復 提取 3 次，合并濾液，使用電磁爐保持微沸狀態濃縮濾 液至 1 L，放至室溫，離心（4 500 r/min，10 min），棄去沉 淀。向上清液中加入醫用酒精，調節乙醇終濃度為 80%，沉淀過夜，離心（4 500 r/min，10 min），收集沉淀。 向沉淀中加入 800 mL 蒸餾水，充分溶解，重復醇沉 1 次。沉淀用蒸餾水復溶后冷凍干燥，得五味子總多糖 （Water-soluble S. chinensis polysaccharides ，WSP）。

3 結果與分析

五味子多糖產率為 5.2%。通過 HPLC 分析單糖 組成，結果表明，WSP 主要由 GalA 組成 （70.3%），其余還有 Glc（11.1%）和 Gal（7.8%）等； WSP-30 主要是 GalA（96.2%）組成；WSP-60 主要由 GalA（83.8%）組成，此外還含有少量的 Rha（4.0%）、 Ga（l 6.5%）、Glc（3.2%）和Man（2.4%）；WSP-80主要由 GalA（45.7%）和 Glc（26.8%）組成。WSP-30、WSP-60 和 WSP-80 中均含有豐富的 GalA，其中，WSP-30 中 GalA 含量更是高達 96.2%。GalA 是一種果膠類物質 的主要成分，分子量較大，在乙醇中的溶解度小，低濃 度乙醇易使其沉淀，GalA 在 WSP-30、WSP-60、 WSP-80 中的含量依次降低。IC50 值也是表示抗氧化能力的一個指標，IC50 值 越低，抗氧化劑的自由基清除能力越強。WSP-30 的 DPPH 自由基清除能力最強，IC50 值為 0.101 mg/mL； 其次為陽性對照Vc、WSP，IC50值分別為0.163 mg/mL、 0.173 mg/mL；WSP-80、WSP-60 的 IC50 值分別為 0.525 mg/mL、1.946 mg/mL。

4 討論

果膠是多糖的一種，在許多植物中含量豐富，具有 多種活性。GalA為果膠的標志性組分，通常認為，GalA 含量超過65%的多糖可稱為果膠，因此，WSP、WSP-30 與 WSP-60 均屬于不可多得的天然果膠類物質，尤其 是 WSP-30。許多果膠可作為增稠劑、穩定劑等應用 于食品工業中，或作為一種水溶性膳食纖維應用于保 健食品和藥品中。對WSP 及其子級分的甲酯化度、 凝膠特性等進行研究和分析，可以為五味子多糖的應 用提供基礎，也是課題組下一步工作的重點。尿病、自身免疫性疾病等。自由基氧化應激反應對許 多生物大分子均有損傷作用，最常見的是對蛋白質和 DNA 的破壞。



 

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