用KQ-100E對(duì)茶堿和可可堿的分析

目前市售飲料的種類五花八門，質(zhì)量亦是參差不 齊，尤其是含咖啡因等成分的軟飲及功能性飲品十分 暢銷?？Х纫蚣?1，3，7 － 三甲基黃嘌呤，屬國(guó)家管制 的精神藥品范圍，能夠暫時(shí)驅(qū)走睡意并恢復(fù)精力，適 度使用有祛除疲勞、興奮神經(jīng)的作用，但大劑量或長(zhǎng) 期使用會(huì)對(duì)人造成損害，具有成癮性，一旦停用會(huì)出現(xiàn)精神萎頓、渾身困乏疲軟等各種戒斷癥狀。

1 材料與方法 

1． 1 儀器與試劑 

API 4000 Q TＲAP 四極桿 － 線性 離子阱質(zhì)譜儀( 美國(guó) AB 公司) 配備 DGU － 20A 超高 效液相色譜儀( 日本島津公司) ; HΜMAN POWEＲ/ Elix Essential 超 純 水 儀 ( 法國(guó)默克密理博公司) ; EYELA渦旋震蕩器( 中國(guó)上海愛(ài)朗儀器公司) ; KQ － 100E 超聲波清洗器( 中國(guó)昆山舒美公司) ; FA2014 電 子天平( 中國(guó)上海舜宇恒平公司) ; XMTD － 204 水浴 鍋( 中國(guó)上海博訊公司) ; 5804Ｒ 型高速離心機(jī)( 德國(guó) 艾本德公司) 。標(biāo)準(zhǔn)品: 咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液( 500 μg /ml， 中國(guó)上海安譜公司) ; 茶堿、可可堿粉末標(biāo)準(zhǔn)品( 純度 均 ＞ 98% ，中國(guó)上海安譜公司) ; 甲醇( 色譜純，批號(hào): 176221) ; 乙醚( 色譜純，批號(hào): 20170421) ; 三氯甲烷 ( 色譜純，批號(hào): 20160604) ; 異丙醇( 色 譜 純，批 號(hào): 20160719) ; 1% 氫氧化鈉溶液; 0． 1% 稀鹽酸溶液; 甲 酸( 優(yōu)級(jí)純，批號(hào): A0346840) ; 乙酸銨( HPLC 級(jí)，批 號(hào): 134513) 。

1． 2 方法

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制: 分別將可可堿、茶 堿標(biāo)準(zhǔn)品配制為 1 mg /ml 的甲醇儲(chǔ)備液。工作液配 制: 取可可堿、茶堿儲(chǔ)備液各 10 μl，咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品溶 液 20 μl，加入 960 μl 甲醇，配制為 10 μg /ml 的混合 對(duì)照品溶液。將混合對(duì)照品溶液添加到水中，配制可 可堿、茶堿和咖啡因的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液( 10 ng /ml、 20 ng /ml、50 ng /ml、200 ng /ml、500 ng /ml、800 ng /ml、 1 000 ng /ml) ，各取 1 ml，分別加 2 ml 三氯甲烷 － 異 丙醇( 9∶1，V /V) ，渦旋 5 min，2 500 r/min 離心5 min， 取下清液 1 ml 于進(jìn)樣小瓶，等待進(jìn)樣檢測(cè)。液相色譜條件: 色譜柱為 Allure PFPP 色譜柱( 100 mm × 2． 1 mm，5 μm) ; 以 5 mmol /L 乙酸銨( 含 0． 05% 甲酸，5% 甲醇) 溶液為流動(dòng)相 A， 甲醇 為 流 動(dòng) 相 B，進(jìn) 行 梯 度 洗 脫 ; 流 速 為 0． 50 ml /min，柱溫為 50 ℃，進(jìn)樣量為 5 μl。

2 結(jié) 果

在 ESI + 模式下，待 測(cè)物［M + H］+ 的峰均明顯高于［M + NH4］+ 峰，因此 本實(shí)驗(yàn)選擇［M + H］+ 作為母離子。根據(jù)子離子的豐 度及基質(zhì)對(duì)待測(cè)物的干擾。對(duì)碰撞氣、電噴霧電壓、霧化器 和氣簾氣進(jìn)行優(yōu)化，使分子離子與特征離子對(duì)信號(hào)強(qiáng) 度的響應(yīng)值達(dá)到最佳。連接流動(dòng)相，對(duì)離子源溫度、 輔助氣 流 速 進(jìn) 行 優(yōu) 化，使目標(biāo)物離子化效率達(dá)到 最好。當(dāng)流動(dòng)相中有機(jī)相為乙腈時(shí)，3 個(gè)待測(cè)物整體響 應(yīng)較低，可能是由于乙腈對(duì)待測(cè)物的洗脫能力不足。 流動(dòng)相采用等度洗脫時(shí)待測(cè)物分離效果不理想。當(dāng) 有機(jī)相為甲醇，水相為 5 mmol /L 乙酸銨溶液( 含 5%甲醇、0． 05% 的甲酸) 時(shí)峰形較為理想。在上述條件 下，比較了 Agilent Zorbax SB － C18 ( 150 mm × 2． 1 mm， 5 μm) 、菲羅門的 Allure PFP Propyl( 100 mm ×2． 1 mm， 5 μm) 等幾種色譜柱對(duì)樣品進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)使 用菲羅門的 Allure PFP Propyl 色譜柱時(shí)待測(cè)物峰形較 窄且對(duì)稱，分離效果也較佳，故本實(shí)驗(yàn)選用 Allure PFP Propyl 色譜柱用于飲料中咖啡因、茶堿和可可堿的定 性定量分析。

3 結(jié) 論 

基于液液提取 － LC － MS /MS 建立的市售 飲料中咖啡因、茶堿及可可堿成分的快速定性定量分 析方法簡(jiǎn)單易行，分析時(shí)間短，靈敏度高，能夠滿足日 常實(shí)際檢測(cè)要求。且將本法實(shí)際應(yīng)用于奶茶、速溶咖 啡、可樂(lè)等多種不同種類的市售飲料中檢測(cè)，驗(yàn)證了 方法可行性，適用于所有飲料樣品的快速檢測(cè)，初步 構(gòu)建了飲料中咖啡因含量數(shù)據(jù)庫(kù)，可為生產(chǎn)和監(jiān)管部 門提供方法參考及基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，為相關(guān)中毒案件的法醫(yī) 毒物分析提供理論依據(jù)。

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