葡萄糖苷的超聲波前處理工藝分析（KQ-500DE使用）

亞麻籽在我國內(nèi)蒙、河北、寧夏、山西等地區(qū)被 廣泛種植，因其豐富的營養(yǎng)成分而備受歡迎。亞麻 木酚素是亞麻籽特有的一類生理活性物質(zhì)，包括開 環(huán)異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷( 簡稱 SDG) 、馬臺樹 脂醇、羅漢松脂酚、落葉松樹脂醇等。

1 材料與方法 

1． 1 試驗材料 

1． 1． 1 原料與試劑 

亞麻籽，產(chǎn)自新疆且由寧夏君星坊科技有限公 司提供; SDG 標(biāo)準(zhǔn)品( 純度≥98% ) ，北京世紀(jì)奧科 生物技術(shù)有限公司; 甲醇、乙醇、乙腈、正己烷、冰乙 酸、氫氧化鈉、濃鹽酸等，分析純，國藥集團化學(xué)試劑 有限公司; 甲醇，色譜純，國藥集團化學(xué)試劑有限公 司; 超純水，實驗室自制。 

1． 1． 2 儀器與設(shè)備 

Waters 1525 高效液相色譜儀，Waters 2996 可變 波長二極管陣列檢測器; 昆山舒美KQ-500DE型數(shù)控超聲波 清洗器，昆山舒美超聲儀器有限公司; Ｒ － 501 旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)器、SHB － 3 循環(huán)水真空泵，上海申順生物科技 有限公司; AL204 電子天平，梅特勒 － 托利多儀器有 限公司; Anke TGL － 16G 臺式離心機，上海安亭科 學(xué)儀器廠。 

1． 2 試驗方法 

1． 2． 1 亞麻籽的預(yù)處理 

稱取經(jīng)除雜的亞麻籽 450． 0 g( 精確至 0． 1 g) ， 將其粉碎，按料液 比 1 ∶ 5 加 入 正 己 烷，50 ℃ 攪 拌 ( 200 r/min) 6 h，抽濾、揮干溶劑、粉碎、過 20 目篩即 得脫脂亞麻籽粉，冷藏備用。 

1． 2． 2 SDG 檢測的超聲波輔助萃取前處理 

稱取 1． 500 g( 精確至 0． 001 g) 脫脂亞麻籽粉， 依次加入一定料液比的溶劑，置于一定溫度的恒溫 水浴中，在一定超聲功率下萃取一定時間，離心并合 并萃取一定次數(shù)的上清液，旋蒸后加入 4． 5 mL 0． 3 mol /L 的 NaOH 溶 液，常 溫 水 解 6 h，再 加 入 0． 6 mol /L 鹽酸溶液調(diào)節(jié) pH 至 6． 5 ～ 7． 5，旋蒸去除溶 劑，加入色譜純甲醇溶解并定容至 10 mL，用 0． 45 μm 醋酸纖維素膜過濾，采用 HPLC 測定 SDG 含量 ( 以每克脫脂亞麻籽粉所含的 SDG 含量計) 。

1． 2． 3 HPLC 測定SDG 含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 

稱取 SDG 標(biāo)準(zhǔn)品 5． 00 mg( 精確到 0． 01 mg) ， 色譜純甲醇溶解定容配制成 0． 5 mg /mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲 備溶液，定容稀釋配制成質(zhì)量濃度分別為 0． 5、0． 2、 0． 08、0． 032、0． 128、0． 005 12 mg /mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。 參考 Li 等的方法( 略作改動) ，進行 HPLC 檢測 并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 色譜條件: 流動相 A 相為超純水 － 乙酸( 體積比 98∶ 2) ，B 相為甲醇; 柱溫 30 ℃; 流速 0． 8 mL/min; 洗 脫梯度為 0 min 時 85% A、15% B，20 min 時 85% A、 15% B，30 min 時 72% A、28% B，40 min 時 72% A、 28% B，60 min 時 45% A、55% B，70 min 時 45% A、 55% B，80 min 時 15% A，85% B，81 min 時 85% A、 15% B，91 min 時 85% A、15% B。 經(jīng)擬合得到 SDG 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 y = 1 × 107 x － 99 803，其中 x 為峰面積、y 為 SDG 質(zhì)量濃度，相關(guān) 系數(shù) Ｒ2 為 0． 999 4。 

1． 2． 4 HPLC 測定亞麻籽樣品中 SDG 含量 

取 1． 2． 2 所制取樣品按 1． 2． 3 進行 HPLC 測 定，將峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，計算 SDG 含量。 

2 結(jié)果與討論 

2． 1 萃取溶劑的選擇 

在料液比 1∶ 20、超聲溫度 35 ℃、超聲功率 800 W 的條件下超聲 2 h，萃取次數(shù) 1 次，考察萃取溶劑 對 SDG 含量的影響。根據(jù) SDG 的結(jié)構(gòu)性質(zhì)，選用 極性溶劑進行萃取前處理，所選溶劑為乙醇、甲醇、 乙腈及 90%的甲醇 － 水溶液，結(jié)果如圖 1 所示。

由圖 1 可以看出，90% 甲醇 － 水溶液作為萃取 溶劑時 SDG 含量很低，這是因為在旋蒸去除溶劑的 過程中，整個溶液體系出現(xiàn)起泡現(xiàn)象，導(dǎo)致樣品損 失，從而使得 SDG 含量很低，因此含水有機溶劑不 適合用作萃取劑。而在純?nèi)軇┑膶Ρ戎校? 種溶劑 萃取所得 SDG 含量由低到高依次為乙醇 ＜ 乙腈 ＜ 甲醇，并且差異較大，甲醇萃取效果最好，因此確定 萃取溶劑為甲醇。 

2． 2 料液比的選擇 

以甲醇為萃取溶劑，在超聲溫度 35 ℃、超聲功率 800 W 的條件下超聲 2 h，萃取次數(shù) 1 次，考察料 液比對 SDG 含量的影響，結(jié)果如圖 2 所示。

3 結(jié) 論 

對 HPLC 測定亞麻籽中 SDG 含量的超聲 波輔助萃取前處理條件進行了研究，通過單因素試 驗確定了超聲波輔助萃取前處理的最佳條件: 以甲 醇為萃取溶劑，料液比 1∶ 20，超聲時間 2 h，超聲溫 度 35 ℃，超聲功率 800 W，萃取次數(shù) 3 次。在最佳 條件下，測得亞麻籽中 SDG 含量為 11． 40 mg /g。

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