分析紅樹莓葉抗氧化活性-KQ500DE使用

紅樹莓（Rubus ideaus L.）屬薔薇科懸鉤子屬，俗 稱覆盆子、托盤等。紅樹莓在世界溫帶范圍內被廣泛 種植，我國東北地區是紅樹莓的主產區，資源豐富， 種植歷史久，規模大，品種多。在過去的20 a中，樹莓 和其他小漿果的產量不斷增長，市場也在不斷擴大。 然而紅樹莓葉的利用程度沒有紅樹莓果實高，僅有少數 制成茶葉或用于醫藥用途，并未得到充分的利用。近 年來植物豐富的多酚類物質已成為目前研究的熱點。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

歐洲紅、澳洲紅、紅寶石、秋福、哈瑞泰茲、杜拉 明6 種紅樹莓葉片均采自黑龍江省農業科學院園藝分院試驗田，2018年8月19日采莖尖第5～10片葉，密封冷藏避 光運回東北林業大學食品科學實驗室凍藏。 標準品：蘆丁、槲皮苷、金絲桃苷、綠原酸、鞣 花酸、異鼠李素、表兒茶素、兒茶素、丁香酸、沒食 子酸、阿魏酸、咖啡酸、木犀草素（均為色譜純，純 度≥98%） 上海源葉生物科技有限公司；其他試劑均 為國產分析純。

1.2 儀器與設備

722S分光光度計 上海光譜儀器有限公司； FA2004電子天平 常熟市意歐儀器儀表有限公司； DHG-9030A電熱恒溫鼓風干燥箱 鞏義市予華儀器有限責任公司；PHS-3E型pH計 上海儀電科學儀器股份 有限公司；昆山舒美KQ-500DE超聲波清洗機 昆山市超聲儀器有限公司； 6470液相色譜-質譜聯用儀（配有電噴霧離子源，Mass Hunter數據處理系統） 美國安捷倫公司。

1.3 方法

1.3.1 紅樹莓葉中活性成分含量測定

1.3.1.1 紅樹莓葉片水分含量

參照GB 5009.3—2016《食品中水分的測定》測定 6 種樹莓葉片中的水分活度，根據紅樹莓葉水分活度折 算成每克紅樹莓葉干質量的活性物質含量及抗氧化活 性能力。

1.3.1.2 樣品提取

紅樹莓葉解凍后研磨成勻漿，精確稱取5.00 g勻漿 液加入50 mL含0.1%乙酸的甲醇溶液超聲提取1 h。將提 取物于4 ℃黑暗環境中放置24 h，過濾并收集上清液（以 上程序重復3 次）。在40 ℃條件下減壓旋轉蒸發餾分 物質，合并餾分，用60%甲醇溶液定容至100 mL容量瓶 中。用于酚類化合物分析和抗氧化評價。

1.3.1.3 福林-酚法測定總酚含量

參考Pantelidis等的方法測定。以沒食子酸為標 準品，沒食子酸質量濃度（mg/mL）為橫坐標，765 nm波長處吸光度為縱坐標。其線性回歸方程為y=8.850 3x＋ 0.011 1（R2 =0.999 1）。總酚含量根據紅樹莓葉含水量折 算成每克紅樹莓葉干質量含總酚的質量（mg/g）。

1.3.1.4 硝酸鋁比色法測定總黃酮含量

參考張海悅等的方法測定。以蘆丁為標準品， 蘆丁質量濃度（mg/mL）為橫坐標，510 nm波長處吸 光度為縱坐標。其線性回歸方程為y=1.022 9x＋0.000 3 （R2 =0.999 2）。總黃酮含量根據紅樹莓葉含水量折算成 每克紅樹莓葉干質量含總黃酮的質量（mg/g）。

1.3.1.5 香草醛-硫酸法測定原花青素含量

參考孫蕓等的方法測定。以兒茶素為標準品， 兒茶素質量濃度（mg/mL）為橫坐標，500 nm波長處吸 光度為縱坐標。其線性回歸方程為y=1.695 7x－0.001 0 （R2 =0.999 4）。原花青素含量根據紅樹莓葉含水量折算 成每克紅樹莓葉干質量含原花青素的質量（mg/g）。

1.3.2 紅樹莓葉的抗氧化能力測定

1.3.2.1 鐵離子還原能力（ferric reducing antioxidant power，FRAP）測定

參考Benzie等的方法測定。以VC作陽性對照。紅 樹莓葉片提取物采用恒質量法確定樣品質量濃度進行適 當稀釋。通過比較不同紅樹莓葉片提取物中加入FRAP工 作液后的吸光度大小，分析其FRAP強弱。

2 結果與分析

紅樹莓葉提取物的FRAP與樣品質量 濃度呈良好的質效關系。在質量濃度為50～70 mg/mL 時，秋福、紅寶石、澳洲紅的FRAP均高于VC對照組。 其余3 種略低于VC組。當質量濃度為100 mg/mL時，除 杜拉明外，其他品種紅樹莓葉提取物FRAP高于VC對照 組。以不同濃度FeSO4（mmol/L）溶液為橫坐標，734 nm 波長處吸光度為縱坐標，得到曲線方程為y=0.560 3x＋ 0.157 9（R2 =0.999 8），所有品種紅樹莓葉提取物的FRAP均高于VC， 6 種紅樹莓葉提取物的FRAP大小依次為秋福＞紅寶石＞ 澳洲紅＞歐洲紅＞哈瑞泰茲＞杜拉明。紅樹莓葉提取物的總酚與ABTS陽離子 自由基清除能力（r=0.886，P＜0.05）和DPPH自由基 清除能力（r=0.891，P＜0.05）有顯著的正相關關系； ABTS陽離子自由基清除能力與DPPH自由基清除能力的 相關性極顯著，相關系數為0.992；即總酚對抗氧化活 性的貢獻最高，在檢驗紅樹莓葉抗氧化活性時可以選用 ABTS陽離子自由基清除能力與DPPH自由基清除能力 中的一種與其他檢測方法共同評價紅樹莓葉片的抗氧化 能力；這與Floegel等的結論相似。本研究中總黃酮和 原花青素與DPPH自由基清除能力和ABTS陽離子自由基 清除能力均為正相關但不顯著，但總黃酮與總酚的相關 性較高（r=0.801），因為黃酮從屬于多酚，所以在抗 氧化活性貢獻上黃酮可以歸入酚類物質行列，按照這種 方法計算出總黃酮對DPPH自由基清除能力和ABTS陽離 子自由基清除能力相關性為0.710和0.713，與Pearson分析 結果相近（0.607、0.631）；說明在總酚的抗氧化活性貢 獻上總黃酮起到了較高程度的貢獻作用，與劉世馨等的實驗結果一致。

3 結 論

本實驗比較了6 種不同品種紅樹莓葉中總酚、總黃 酮、原花青素的含量及其與抗氧化活性的相關性；采用 UPLC-MS/MS法對樹莓葉中多酚類物質進行定性定量檢 測，該方法靈敏，高效。檢出的13 種多酚以蘆丁和鞣 花酸為主，含有少量的兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、 綠原酸、沒食子酸，微量的槲皮苷、木犀草素、異鼠李 素、阿魏酸、咖啡酸、丁香酸。相較于VC，6 種紅樹莓 葉提取物抗氧化活性良好。紅樹莓葉中的其他酚類（酚 酸類）物質尚需進一步鑒定。



 

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