昆山超聲清洗器在黃酮提取工藝優化中的應用

黃精為百合科植物多花黃精 Polygonatum cyrtonema Hua.、黃精 Polygonatum sibiricum Red.、滇 黃精 Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl.的干燥根 莖，主要分布于我國中南部地區及江蘇、安徽、福 建、江西、浙江等省，現為緊缺的大宗藥材之一。 據多項科學考察報告及藥用植物志記載，福建龍棲 山、閩江源自然保護區、君子峰自然保護區、天寶巖 自然保護區、明溪縣等地區蘊藏有豐富的多花黃精野 生資源。因此，本研究采用可視化分析技術，初步 探索多花黃精的總黃酮提取工藝，為深入研究多花黃 精的藥材質量，以及確定其優質藥材的評價標準提供依據。

FA20004N 型電子分析天平，上海精密科學儀器有限公司；UV-9100 型紫外可見分光光度計，北京瑞利分析儀器公司；KQ-500E 型超聲波清洗儀，昆山舒美；HH-4 型數顯恒溫水浴鍋，國華 電器有限公司；SHB-Ⅲ型循環水式多用真空泵，鄭州 長城科工貿有限公司。 黃精飲片，購于福建中醫藥大學國醫堂，經福建中醫藥大學藥學院實驗師王河山鑒定，為百合科植物 多花黃精 Polygonatum cyrtonema Hua.的干燥根莖；蘆 丁對照品（HPLC 純度≥98%，批號 Y06J8S37439）， 上海源葉生物科技有限公司；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫 氧化鈉、無水乙醇等試劑均為分析純，實驗用水為超純水。

精密稱取蘆丁對照品 10 mg，置于 50 mL 量瓶中， 用 70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為 0.2 mg/mL 的蘆丁對照品溶液。分別精密吸取蘆丁對 照品溶液 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL 于 25 mL 量瓶 中，均加入 70%乙醇至 10 mL，再加入 5%亞硝酸鈉 溶液 0.7 mL，搖勻，放置 6 min，再加入 10%硝酸鋁 溶液 0.7 mL，搖勻，放置 6 min，再加入 4%氫氧化鈉 溶液 5.5 mL，用 70%乙醇定容至刻度，搖勻，放置 15 min，以 70%乙醇作為參比溶液，于分光光度計波 長 510 nm 處測定吸光度值。以吸光度為縱坐標，蘆 丁含量（mg）為橫坐標，進行回歸處理，繪制標準曲 線。結果表明，蘆丁對照品含量在 0.1～1.6 mg 范圍 內與吸光度線性關系良好，回歸方程為 Y＝0.538Ｘ＋ 0.013，r 2 ＝0.998。

本研究選用 U10（108 ）均勻設計表，以乙醇濃度、 提取時間、提取次數、提取溫度、固液比為考察因素， 每個因素設 10 個水平，進行組方設計（見表 1），得 到 10 組方案。

2.2.2 樣品制備

取 20 g 黃精藥材，按表 1 設計分別提取制備樣品 液，過濾、減壓回收，制得終濃度均為 1 g/mL 的藥 液，備用。 2.2.3 樣品含量測定 本研究以總黃酮含量為評價指標。取樣品液適 量，按“2.1”項下方法測定總黃酮含量。根據蘆丁標 準曲線的回歸方程，計算各樣品液中總黃酮含量，結 果見表 2。

2.3 可視化分析

采用 Surfer8.0 軟件對試驗數據進行可視化分 析[6]，通過將獲得的數據直接與考察變量繪成多幅二 維圖的方式，同時考察 2 種不同的影響因素與考察指 標之間的關系，可直接從數幅圖中找出最佳工藝的優 化區域。

以乙醇濃度為橫坐標，分別以提取溫度、提取時 間、提取次數和固液比為縱坐標，將試驗數據繪成二維圖。二維圖直觀反映出在不同考察因 素條件下乙醇濃度對總黃酮提取效果的影響。可以看 出，在乙醇濃度＜40%的區域內，總黃酮提取效果影 響度淺，提取率低；在乙醇濃度為 50%～70%的區域 內，總黃酮提取效果影響度最深，提取率高。故乙醇 濃度影響總黃酮提取效果的最佳范圍為 50%～70%。

以提取時間為橫坐標，分別以乙醇濃度、提取溫 度、提取次數和固液比為縱坐標，將試驗數據繪成二維圖。二維圖直觀反映出在此不同考察 因素條件下提取時間對總黃酮提取效果的影響。可以 看出，在提取時間為 90～110 min 和 140～150 min 的 區域內，總黃酮提取效果影響度最深，提取率高，尤 其是 140～150 min 區域。故提取時間影響總黃酮提取 效果的最佳范圍為 140～150 min。

本研究采用均工藝。由于均 不能采用常規 過非線性、線 建立多元/一元 Au 佳范圍 橫坐標，分別 次數為縱坐標 二維圖直觀 對總黃酮提 ∶8 的區域內 在固液比為 效果影響度最 取效果的最佳 均勻設計優選 均勻設計的 規的方差分析 線性或逐步 元函數模型進 提取溫度 提取溫度 固液比 固液比 ug.2019 Vo 別以乙醇濃度 標，將試驗數 觀反映出在此 取效果的影 內，總黃酮提 為 1∶14～1 最深，提取率 佳范圍為 1∶ 選多花黃精 試驗結果沒 析方法進行數 回歸分析的 進行定量分析 l.26 No.8 、提取溫度、 數據繪成二維 此不同考察因 響。可以看 提取效果影響 ∶18 的區域 率高。故固液 14～1∶18。 中總黃酮的 有整齊可比 數據分析，需 方法篩選變 析。本研究結果數據采用非線性、線性或逐步回歸分析方法均難 以建立有效的函數模型，因而本研究采用一種直觀、 簡明的分析方法——可視化分析法，將試驗所得結果 數據與考察變量繪成多幅二維圖，同時考察 2 種不同 的影響因素與考察指標之間的關系，直接從數幅圖中 找出最佳工藝的優化區域。近年來，可視化分析法 在中藥研究中得到了較為廣泛的應用。本研究對 試驗數據進行可視化表征，利用二維圖整體反映不同 提取條件下多花黃精藥效成分的含量，實現了提取工藝的優化。